尊龙凯时专注于提供细胞体外基因敲除解决方案，致力于为客户量身定制细胞基因敲除服务。目前，我们已提供以下多种细分敲除服务，欢迎与尊龙凯时团队联系，获取更多技术路线及成功案例资料。

定制服务与支持

尊龙凯时提供真核细胞的体外基因敲除定制服务。针对该服务，我们的团队将定期更新Q&A，以便更好地满足客户的需求。以下是最新的Q&A【2503版】的前20个关于基因敲除定制服务的常见问题：

基因敲除服务常见问题

21. 如何验证基因敲除是否成功？

22. 精准敲除和模糊敲除如何区别？

(1) 精准敲除：通过同源重组（HDR，Homology-Directed Repair）机制，在目标基因中引入精准的修饰，例如特定片段的删除、点突变或插入，从而实现完全或部分失活基因功能。精确敲除的实验策略通常不同于一般的基因敲除，通常所说的基因敲除指的是模糊敲除。尊龙凯时提供精准敲除定制服务，专注于对靶基因指定区域的核苷酸序列进行敲除、敲入及突变等操作。

(2) 模糊敲除：通过非同源末端连接（NHEJ，Non-Homologous End Joining）机制，在目标基因的明确区域引入随机的插入或缺失（Indel）突变，导致编码框的移位或提前终止密码子，从而破坏基因功能。

23. CRISPR/Cas9方法可以敲除的最大片段范围大概有多少？

理论上可实现1kb至1Mb范围的敲除，通过结合多靶点切割技术或其他方法（例如CRISPRa/i、表观遗传修饰），可达到超大片段敲除（1Mb）。

24. 如何提高原代细胞的编辑效率？使用病毒载体（如慢病毒/AAV）整合入基因组、电场诱导细胞膜穿孔、贴壁或悬浮原代细胞（需优化参数），核转染直接将Cas9-RNP导入难转染的细胞（如原代T细胞），以及采用阳离子脂质包裹Cas9-sgRNA复合物等方法均可提升编辑效率。

25. 如何提高基因敲除效率？

26. 如何分析基因敲除后的表型变化？

27. 如何区分纯合敲除与杂合敲除？

28. CRISPR RNP法适用的细胞及应用场景有哪些？

结语

CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法通过将靶基因对应的多条体外合成的single-guide RNA（sgRNA）与Cas9蛋白体外混合，形成核糖核蛋白复合物（RNP），再以电转化或脂质体转染的方式快速递送至细胞内，这样便能获得高效且稳定的细胞群体。与传统的慢病毒/质粒法相比较，尊龙凯时的CRISPR/Cas9 RNP法避免了外源序列的引入，从而极大地降低了脱靶效应，同时还防止了病毒基因组的随机整合对后续实验的影响。随着CRISPR/Cas9 RNP法的逐步普及，基因敲除细胞系的构建将开始全面取代传统方式。