校正染料(ROX)用于校正加样误差或孔间误差，其作用在于提供一个稳定的基线，从而显著提升定量分析的精确度，并提高样本之间的数据重现性。需要注意的是，不同仪器对ROX的需求存在差异。在基线PCR的最初几个循环中，荧光信号变化极小，确保了结果的可靠性。阈值设定为可置信的最低荧光值，而CT值则为扩增曲线与阈值交点的横坐标。

尊龙凯时特别关注结果的有效性判断。融解曲线应呈单峰状（使用染料法），扩增曲线应显示指数扩增区域，并且复孔间的CT值标准偏差（STD）应小于0.2。此外，合理的阈值设置应位于指数增长阶段，尽管仪器会自动计算阈值，但在某些情况下，可能需要进行手动调整以确保准确性。

NTC（No Template Control）检测能够确认无气溶胶污染，将水作为模板代替；若ΔCT值（NTC CT值 - 目标基因 CT值）大于等于3或5，则可以推测气溶胶污染对实验结果的准确性没有影响。同时，NRT（No RT Control）也可用于确认无基因组残留，测试中仅去除逆转录酶组分；若ΔCT值（NRT CT值 - 目标基因 CT值）超过3或5，可认为基因组残留不影响实验结果的可靠性。

在待测CT值处于线性范围内时，PCR的扩增效率应符合标准计算，效率(e)应在90%-120%之间。

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