小鼠肺微血管内皮细胞构成了一种半选择性屏障，对于肺部的气体交换以及血液与肺间质之间液体和可溶物的调节具有重要意义。这种屏障不仅参与气体交换，还具备一定的代谢功能，能够执行非呼吸相关的生理功能。在肺损伤的情况下，肺微血管内皮细胞成为活性氧的主要靶细胞之一。在肺炎的发生中，神经体液介质与氧化剂的作用会导致内皮细胞的细胞间隙渗透性增加，从而使蛋白质从血液渗透进入间质。这种细胞间隙渗透性的增加会造成低氧血症，进而导致成人呼吸窘迫综合征和非心源性肺水肿的发生。

小鼠肺微血管内皮细胞来源于实验动物的正常肺组织，具有上皮样、多角形的特点，能够在贴壁培养中存活。通过CD31免疫荧光染色技术鉴定，细胞纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母及真菌等污染物。

实验所需仪器设备及试剂

1) 仪器

• 生物安全柜 BSC-1500ⅡA2-X
• CO2细胞培养箱 BC-J160S
• 荧光倒置显微镜 DS-Ri2
• 高速冷冻离心机 MultifugeX1R
• 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A
• 电热恒温震荡水槽 DK-2B

2) 试剂耗材

• T25细胞培养瓶 430639
• 血球计数板 Neubauer improved
• 24孔板专用细胞爬片 YA0350
• 细胞培养孔板 WHB-24
• 胎牛血清 1414426
• 内皮细胞培养基 Primed-icell-0020
• 25%胰蛋白酶（含0.02% EDTA）1734858

小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1) 将5-10天的乳鼠浸泡于75%乙醇中后，移入生物安全柜。
2) 对乳鼠进行胸部解剖，并将双肺取出，置于预冷的PBS中，尽可能去除结缔组织等杂质。
3) 切割肺的边缘部分，将其剪碎，并移入T25培养瓶中，倒置放置于细胞培养箱中。
4) 2小时后，在培养瓶中注入2 mL内皮培养基，并小心正置，以确保组织块不漂浮。
5) 每3天更换2 mL培养基，待细胞从组织块中爬出后，每2天更换一次培养基，待细胞融合度达到60-70%时，去除组织块，并将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

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