“细胞外囊泡”（EVs）是细胞自然释放的一种细胞衍生颗粒，其由磷脂双分子层组成。EVs广泛存在于血液和尿液等体液中。EVs的特性，如细胞来源、浓度、组成和功能与各种疾病存在密切关联。因此，研究者们正在探讨将EVs作为癌症和心血管疾病等的生物标志物。然而，想要确定EVs作为生物标志物的有效性，必须依赖于可靠且可重复的测量方法。目前的主要障碍是不同实验室和仪器之间测量结果的不一致性，这限制了多中心研究的开展，而多中心研究恰是临床生物标志物研究的基础。

为提高数据的可比性，本研究开发了符合EVs物理特性的标准参考材料及其相关测量程序。对此，新参考材料和程序的有效性需要通过生物测试样品进行验证。我们开发了一种人血浆EVs测试样品（PEVTES），它具有以下特点：i) 类似于血浆中的亚细胞颗粒，ii) 现成可用，iii) 与流式细胞仪兼容，iv) 稳定性良好。

方法上，我们采用3例空腹供体的血浆来制备PEVTES。通过使用血小板特异性抗原（CD61）和红细胞特异性抗原（CD235a）或乳酸粘附素抗体对EVs进行免疫荧光染色。为了降低可溶性蛋白、脂蛋白及未结合试剂的浓度，我们从血浆中分离染色过的EVs，然后通过08μm孔径的聚碳酸酯滤器去除残留血小板。在分离后，我们将PEVTES与冷冻保存剂（如二甲亚砜DMSO、甘油或海藻糖）稀释，并在-80℃下保存12个月。

解冻后，利用校准的纳米流式细胞仪（Apogee A60-Micro）测量染色EV的浓度。为了评估PEVTES的稳定性，我们在冷冻之前以及在-80℃保存1、3、6和12个月后，利用流式细胞仪对其EVs浓度进行测量，并对流速、荧光信号以及光散射信号进行校准。

研究结果表明，PEVTES不仅类似于血浆中的亚细胞颗粒，而且易于使用并与纳米流式细胞术兼容，具备良好的稳定性。这使得PEVTES成为验证新开发的参考材料和测量程序的理想候选物。

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